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Um anticorpo primário é uma imunoglobulina que se liga especificamente a uma determinada proteína ou outra biomolécula de interesse, com a finalidade de a detetar o/ou medir.
Para interpretar corretamente a imunorreatividade dum anticorpo, é importante saber o local esperado de marcação do antigénio de interesse. Conhecer a função biológica da molécula de interesse pode ser muito útil para antecipar intuitivamente o local da reação.
Exemplos de anticorpos com marcação nuclear
Factores de transcrição (TTF-1, CDX2, miogenina, PAX2, WT1, p53, p63). Receptores de hormonas esteróides (ER, PR, AR). Ki67 (excepto no adenoma trabecular da tiróide hialinizante, onde a marcação pode ser de membrana / citoplasmática).
Exemplos de anticorpos com marcação citoplasmática
Proteínas do citoesqueleto e outras proteínas funcionais.
Esta categoria inclui todos os filamentos intermediários (CK, desmina, vimentina, GFAP, neurofilamento), proteínas contráteis (actina), proteínas associadas ao melanossoma (HMB45, Melan-A), produtos de secreção (ACTH, tripsina), e várias outras moléculas funcionais.
Exemplos de anticorpos com marcação de membrana
Receptores (EGFR), moléculas de adesão (E-caderina) e outras moléculas de superfície.
Esta categoria inclui também praticamente todos os CD (differentiation cluster), tais como CD3 e CD20. Ocasionalmente, a marcação de membrana pode ser difícil de distinguir da marcação citoplasmática; esta distinção é importante para várias moléculas em que apenas é considerada específica a marcação de membrana (HER2, EGFR).
Exemplos de anticorpos com dupla marcação (nuclear e citoplasmática)
Embora seja raro, vários antigénios têm reatividade nuclear e citoplasmática.
Esta categoria inclui principalmente as proteínas S100 e Calretinina. A marcação da β-catenina é citoplasmática na maioria dos tipos de células. No entanto, uma mudança na sua reactividade (passa a ser nuclear) é uma característica específica de vários tipos de tumores associados a mutações na via polipose adenomatose coli / β-catenina, tal como como nos tumores desmóides (deep fibromatosis) e cancro do cólon.
Exemplos de anticorpos com marcação citoplasmática granular
Reatividade granular geralmente indica a localização de organelos citoplasmáticos (mitocôndrias, complexo de Golgi, vesículas secretoras, etc).
Racemase (mitocondrial / peroxissomal), Prostein / P501S (Golgi), e napsina A (lisossomal) são exemplos de proteínas com típica marcação granular.
Marcação em “dot” (reatividade com o complexo de Golgi) simultânea com marcação de membrana é típica em CD30 e CD15.
Exemplos de anticorpos com marcação “ponteada”
Marcação “ponteada” (também conhecida como peri-nuclear e dot-like) é típica em citoqueratinas nos carcinomas neuroendócrinos, incluindo o carcinoma de pequenas células (pan-CK) e carcinoma de células de Merkel (CK20). Isso ocorre devido à formação de emaranhados de citoqueratinas.
Exceções à regra
Em alguns casos a falta de imunorreatividade é o que é significativo. Alguns exemplos incluem a perda de DPC4, uma proteína suprimida em 55% dos carcinomas pancreáticos, que suporta o diagnóstico de tumor primário do pâncreas. Outros exemplos são a perda de E-caderina no carcinoma lobular da mama e perda de INI1 em tumores rabdóides.
Nem tudo o que marca castanho é marcação específica. Atenção aos falsos-positivos (exemplos: periferia do tecido a “marcar” inespecificamente, coloração não específica dos hepatócitos devido ao elevado teor de albumina).
Atenção aos falsos-negativos. Observar sempre os controlos (em particular as estruturas normais que servem como controlo positivo interno). Marcação inespecífica citoplasmática para antigénios com esperada localização nuclear (exemplos: TTF-1 ou ER).
Figura I9 – Tipos de marcação de anticorpos primários.
Referencias bibliográficas
Rekhtman, N. & Bishop, J.A., 2011. Quick Reference Handbook for Surgical Pathologists, Springer Berlin Heidelberg.
Dabbs, D.J., 2012. Breast Pathology, Elsevier/Saunders.
Dabbs, D.J., 2002. Diagnostic Immunohistochemistry, Churchill Livingstone.
