Fontana Masson de acordo com Carleton’s Histological Technique
Reagentes e soluções
Nota: existem no mercado empresas que comercializam estas soluções já prontas a serem utilizadas, assim como kits de coloração completos.
Solução 1 – Nitrato de prata a 10%
Nitrato de prata …………………………………………… 10 g
Água destilada …………………………………………….. 100 mL
Solução 2 – Solução de trabalho de nitrato de prata para Fontana Masson
Nitrato de prata a 10% ………………………………………… 20 mL
Adicionar, gota a gota, amoníaco concentrado até a solução ficar turva e com ligeiro precipitado.
Adicionar 20 mL de água destilada e deixar repousar, preferencialmente de um dia para o outro.
Esta solução é melhor se for utilizada logo após o repouso, mas continua a dar bons resultados se ficar alguns dias numa garrafa escura.
Solução 3 – Solução de iodina de Gram
Cristais de iodina ….…………………….. 1 g
Iodeto de potássio ………………………. 2 g
Água destilada ……………………….…… 300 mL
Esta solução pode enfraquecer e perder a coloração após muitos meses.
Solução 4 – Solução stock de cloreto de ouro a 1%
Cloreto de ouro …………………………. 1 mL
Água destilada ………………………….. 99 mL
Solução 5 – Solução de trabalho de cloreto de ouro a 0,2%
Solução stock de cloreto de ouro a 1% ……. 10mL
Água destilada ……………….……………………. 40 mL
Solução 6 – Solução de tiossulfato de sódio a 5%
Tiossulfato de sódio ………………..…. 5 g
Água destilada ………………..…………. 100 mL
Solução 7 – Solução nuclear fast red (kernechtrot)
Fast red nuclear (kernechtrot) …………………. 0.5 g
Sulfato de alumínio ………………………..………. 25 g
Água destilada ………………………………………. 500 mL
Dissolver o sulfato de alumínio na água destilada e, de seguida, dissolver o fast red nuclear nesta solução utilizando calor. Arrefecer, filtrar e adicionar uns grãos de timol para preservar.
Procedimento técnico
1. | Desparafinar e hidratar as lâminas até à água corrente | |
2. | Tratar com iodina de Gram | 10 min |
3. | Tiossulfato de sódio | 2 min |
4. | Lavar em água destilada | 3 x |
5. | Colocar as lâminas na solução de nitrato de prata para Fontana Masson, à temperatura ambiente e no escuro | Durante a noite |
6. | Lavar em água destilada | 3 x |
7. | Solução de trabalho de cloreto de ouro | 3 min |
8. | Lavar em água destilada | |
9. | Tiossulfato de sódio | 2 min |
10. | Lavar em água corrente | 2 min |
11. | Contrastar com nuclear fast red | 2 min |
12. | Lavar em água corrente, desidratar, clarificar e aplicar lamela com meio de montagem sintético |
Resultados
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Referências bibliográficas
- Carleton, H.M., Drury, R.A.B. & Wallington, E.. A., 1976. Carleton’s Histological Technique 4a., Oxford University Press.