Fontana Masson de acordo com Bancroft’s Theory and Practice of Histological Techniques
Reagentes e soluções
Nota: existem no mercado empresas que comercializam estas soluções já prontas a serem utilizadas, assim como kits de coloração completos.
Solução 1 – Nitrato de prata a 10%
Nitrato de prata …………………………………………… 10 g
Água destilada …………………………………………….. 100 mL
Solução 2 – Solução de trabalho de nitrato de prata para Fontana Masson
Nitrato de prata a 10% ………………………………………… 20 mL
Adicionar, gota a gota, amoníaco concentrado ao nitrato de prata, agitando constantemente, até quase se dissolver o precipitado que se formou.
Esta titulação é fundamental para o método correr consistentemente bem. A titulação está terminada quando se vê uma opalescência fraca. Facilita se for utilizada luz refletida contra um fundo escuro.
Se for colocado demasiado amoníaco, adicionar umas gotas de nitrato de prata a 10% para restaurar a opalescência.
Adicionar 20 mL de água destilada e filtrar para frasco escura.
Armazenar a solução no frigorífico e utilizá-la num período de até quatro semanas.
Solução 3 – Solução de tiossulfato de sódio a 5%
Tiossulfato de sódio ………………..…. 5 g
Água destilada ………………..…………. 100 mL
Solução 4 – Solução nuclear fast red (kernechtrot)
Fast red nuclear (kernechtrot) …………………. 0.5 g
Sulfato de alumínio ………………………..………. 25 g
Água destilada ………………………………………. 500 mL
Dissolver o sulfato de alumínio na água destilada e, de seguida, dissolver o fast red nuclear nesta solução utilizando calor. Arrefecer, filtrar e adicionar uns grãos de timol para preservar.
Procedimento técnico
| 1. | Desparafinar e hidratar as lâminas até à água destilada | |
| 2a. | Colocar as lâminas na solução de trabalho de nitrato de prata na estufa a 56ºC | 30-40 min |
| 2b. | Em alternativa, colocar as lâminas na solução de trabalho de nitrato de prata à temperatura ambiente | Durante a noite |
| 3. | Lavar em água destilada | 5 x |
| 4. | Tiossulfato de sódio | 1 min |
| 5. | Lavar em água corrente | 2-3 min |
| 6. | Contrastar com nuclear fast red | 5 min |
| 7. | Lavar em água destilada | |
| 8. | Desidratar e clarificar | |
| 9. | Aplicar lamela com meio de montagem sintético |
Resultados
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Referências bibliográficas
- Bancroft, J.D., Gamble, M. & Suvarna, S.K., 2012. Theory and Practice of Histological Techniques 7a., Elsevier Churchill Livingstone.
