Os corantes utilizados para a coloração citoplasmática são na sua maioria ácidos sulfónicos e carboxílicos (aniónicos), que se combinam com os grupos catiónicos dos tecidos e ligam-se principalmente a proteínas com mais aminoácidos básicos do que ácidos.
Os locais mais comuns de ligação do corante são os aminoácidos arginina, histidina, a lisina e a hidroxilisina.
A eosina, um dos corantes do grupo dos xantenos, é derivada da fluoresceína e está disponível em duas cores: a eosina amarela (eosina Y – vermelho) e a eosina azulada (eosina B – vermelho intenso). Ambas têm auto-fluorescência espontânea e a eosina Y contém quatro átomos de bromo por molécula e a eosina B contém dois átomos de bromo por molécula. Estas formas derivadas de eosina resultam na modificação do seu tom avermelhado, que é proporcional ao ião bromo presente no corante.
Podem ser utilizadas tanto em solução aquosa como em solução alcóolica, no entanto são mais solúveis em água. A eosina Y é o corante mais utilizado em histologia por ser mais solúvel em água. A adição de álcool às soluções de trabalho de eosina atrasam o processo de diferenciação do corante nos passos subsequentes da coloração, tornando o passo de diferenciação mais eficaz.
Figura HQ5 – Eosina Y. FONTE: https://pt.wikipedia.org/wiki/Eosina
Figura HQ6 – Eosina B. FONTE: https://pt.wikipedia.org/wiki/Eosina
A pH 7, a eosina está totalmente carregada. No entanto, o ponto isoelétrico das proteínas é aproximadamente 6. Para que seja possível que as proteínas adquiram carga positiva e poderem ser coradas, a eosina deve ser utilizada a pH abaixo de 6. Contudo, com valores de pH inferiores a 4, a quantidade de corante carregado negativamente cai drasticamante pois a eosina é convertida num ácido livre. O valor de pH ideal para que sejam obtidos pelo menos três intensidades de rosa no tecido corado com a eosina situa-se entre pH 4.6 e 5.
Juntamente com a hematoxilina (a chamada coloração de hematoxilina e eosina – H&E), a eosina é utilizada para corar eritrócitos, fibras do tecido conjuntivo e o citoplasma em diferentes tonalidades de vermelho, rosa ou laranja.
Este corante está disponível para compra em solução comercial pronta a usar.
Eosina alcóolica
Reagentes
Eosina a 1% (Solução Stock)
Eosina Y ……………………………………… 1 g
Água destilada …………………………….. 20 mL
Álcool etílico a 96% ………………………. 80 mL
Eosina (Solução de trabalho)
Eosina a 1% …………………………………. 100 mL
Álcool etílico a 96% ……………………….. 400 mL
Ácido acético glacial ………………………. 0.5 mL
Preparação da solução
Na preparação da solução de trabalho, filtrar após adicionar a eosina ao álcool.
Adicionar o ácido acético glacial.
O ácido acético permite ajustar o pH da solução para valores próximos de 5.
Eosina aquosa
Reagentes
Eosina Y ……………………………………… 1 g
Água destilada …………………………….. 100 mL
Preparação da solução
Após a dissolução da eosina na água, adicionar umas gotas de formol para evitar o crescimento de fungos.
A adição de 0,5 mL de ácido acético a cada 500 mL de solução, ajusta o pH para valores próximos de 5.
Eosina-Floxina B
Alguns laboratórios utilizam uma combinação de eosina com floxina para intensificar a cor do citoplasma e do tecido conjuntivo. A floxina, ou floxina B, é um corante da família dos xantenos, com auto-fluorescência e com dois átomos de cloro e quatro átomos de bromo por molécula. À semelhança da eosina, também cora eritrócitos, fibras do tecido conjuntivo e o citoplasma em diferentes tonalidades de vermelho, rosa ou laranja. Contudo, o músculo é claramente diferenciado do colagénio e os eritrócitos coram de vermelho mais brilhante.
No entanto, este corante não é utilizado “sozinho” na coloração de hematoxilina e eosina devido à sua relativa insolubilidade e fraca capacidade corante.
Figura HQ7 – Floxina B. FONTE: https://pt.wikipedia.org/wiki/Floxina_B
Reagentes
Solução de Floxina a 1%
Floxina B …………………………………….. 1 g
Água destilada …………………………….. 100 mL
Preparação da solução Eosina-Floxina
Eosina Y aquosa a 1% ………………….. 100 mL
Floxina B a 1% …………………………….. 10 mL
Álcool etílico a 96% ………………………. 780 mL
Ácido acético glacial ……………………… 4 mL
Esta solução é estável durante 1 semana.
